Резюме. Целью данного демонстративного опыта является проверка различных средств на селективное антиагрессивное воздействие, связанное с активацией механизма ингибирования насилия. Как было выяснено в ряде исследований на мышах и крысах, применение средств определённого фармакологического воздействия способно приводить к значительному снижению атакующего агрессивного поведения к представителям собственного вида, при этом не затрагивая ни защитное поведение, ни другие формы активности. Речь идёт об агонистах 5-HT_1A и 5-HT_1B рецепторов, а также средствах, нормализующих работу серотонинергической системы через регуляцию экспрессии связанных с ней генов, таких как TPH2, SLC64A и MAO-A. Среди них также есть средства, имеющие натуральное происхождение, например экстракты трав и эфирные масла с определёнными биоактивными веществами, которые являются довольно распространёнными и доступными для приобретения.

В данном опыте для проверки селективного антиагрессивного эффекта на крысах была использована совмещённая парадигма резидента-нарушителя и социальной изоляции. Ряд применяемых в опыте средств продемонстрировал эффект аналогичный тому, что наблюдался в других исследованиях.

Как было выяснено рядом исследователей поведения животных, многим видам свойственно ингибирование внутривидовой агрессии, т. е. прекращение агрессивного нападения при наблюдении определённых социальных сигналов со стороны сородича^[1][2][3]. Аналогичным механизмом обладает и человек, наблюдение которым сигналов бедствия со стороны других людей, таких как выражения грусти и страха, предрасполагает к прекращению агрессивных действий. Также функционирование данного механизма способствует формированию ненасильственной личности, развитию эмпатии, а его дисфункция приводит к возникновению психопатических предрасположенностей и потери чувства отторжения к причинению другим людям вреда^[4][5].

Ключевую роль в регуляции агрессии, и в том числе в функционировании механизма ингибирования насилия, играет серотонинергическая система, а предпосылкой для насильственного поведения является нарушение её работы^{[6][7][8][9][10][11]}. Также применение на животных некоторых агонистов 5-HT_1A и 5-HT_1B рецепторов продемонстрировало селективный антиагрессивный эффект – значительное снижение атакующего агрессивного поведения к представителям собственного вида, при этом не затрагивая ни защитное поведение, ни другие формы активности^{[12][13][14][15][16][17]}.

К снижению атакующей агрессии может также привести применение биоактивных веществ натурального происхождения. Например, инъекции и пероральное применение смеси экстрактов трав Камишойосан снижает агрессивность мышей. Этот эффект связан с активацией 5-HT_1A рецепторов и улучшением регуляции серотонинергической системы^[18]. А пероральное применение смеси Йокукансан, тоже работающей как 5-HT_1A агонист, было протестировано во внутривидовых стычках между мышами и оказало на них селективный антиагрессивный эффект. Также было выяснено, что действующим веществом в этой смеси является гейсошизин метиловый эфир из экстракта ункарии клюволистой^[19]. К селективному антиагрессивному эффекту приводит ингаляция линалоола – компонента большого количества эфирных масел, который тоже является 5-HT_1A агонистом^[20][21].

Эти и многие другие средства натурального происхождения, влияющие на работу серотонинергической системы, могут являться селективными антиагрессивными агентами. И данный опыт продемонстрирует, какой эффект они оказывают на агрессивное поведение крыс. Также будут проверены некоторые синтетические средства аналогичного фармакологического воздействия.

Животные

Для проведения опытов используется 10 линейных крыс (Wistar) – 5 с начальным весом 110-120 гр. (резиденты), и 5 с начальным весом около 90 гр. (нарушители). Особи-резиденты размещаются по отдельности в клетках размером 45x35x45 см., особи-нарушители – группой в клетке 80x60x80 см. Для адаптации особей к проведению опытов необходимо не менее 2 недель. К началу опытов вес всех особей превышает 200 гр., при этом резиденты всегда имеют больший вес, чем нарушители. Необходимо соблюдение 12-часового цикла дня и ночи. Пища и вода находятся в свободном доступе и убираются только на время проведения опытов. Условия содержания особей соответствуют этическим нормам, не допускающим причинение страданий и боли^[22].

Совмещённая парадигма резидента-нарушителя и социальной изоляции

Устройство опыта основано на совмещении социальной изоляции с парадигмой резидента-нарушителя^[23]. Социальная изоляция и территориальность провоцируют у крыс агрессивное атакующее поведение. После минимум 2-недельной адаптации проводятся опыты на измерение поведения особей-резидентов – к ним впускаются особи-нарушители, каждый опыт таким образом, чтобы один и тот же резидент как можно дольше не пересекался с одним и тем же нарушителем. Опытным путём было выяснено, что наиболее оптимальным является проведение 5-минутных опытов не чаще, чем раз в 72 часа. Это сходится с устройством опытов в некоторых исследованиях^[17]. Также опытным путём было выяснено, что в случае нахождения клеток с резидентами в одном помещении для лучшей провокации агрессивного поведения необходимо расположить их на максимально возможном расстоянии и исключить визуальный контакт, например, установлением непрозрачных перегородок между ними.

На 3-5 опыт у крыс вырабатывается стабильное агрессивное поведение. За критерий достаточной агрессивности берётся 10% проявлений атакующей агрессии от всего поведения испытуемой особи^[16]. После соответствия особи данному критерию в течение нескольких опытов проводятся опыты на применение средств. При этом между каждым таким опытом проводится контрольный опыт без применения средств. В случае, если при контрольном измерении поведения особь не проявляет достаточной агрессивности, измерение повторяется. Если какие-то особи не проявляют достаточного агрессивного поведения в течение множества контрольных опытов, они подлежат замене на особей аналогичного веса, которым также необходимо пройти адаптацию.

Измеряются следующие формы поведения: нападения (атаки, сдерживание другой особи, вставание с ней в вертикальные позы, боковые позы угрозы), социальная активность (движение вслед, исследование и ухаживание за другой особью), несоциальная активность (передвижения и исследование территории), неактивность (когда особь преимущественно не передвигается) и вычёсывания.

Средства

Для перорального применения готовые средства разбавлялись в воде и вводились с помощью шприца без иглы за час до проведения опыта. Список средств следующий:

– Цзя Вей Сяо Яо Вань (Jia Wei Xiao Yao Wan) производства MIN SHAN. Это китайский аналог известного средства Камишойосан (Kamishoyosan), которое исследовалось на антиагрессивный эффект через воздействие на 5-HT_1A рецепторы и экспрессию белка TPH2^[18]. Максимальная дозировка: 1 г/кг^[24]. Известно, что при дозировке 200 мг/кг средство максимально повышает социальную активность у мышей^[25].

– Сы Ни Сань (Si Ni San) производства Ли Вест. Имеет в своём составе несколько компонентов из Камишойосан. Средство способно повышать уровень серотонина в центральной нервной системе^[26]. Основное действующее вещество средства – пеонифлорин из экстракта пиона молочноцветкового (белоцветкового), являющегося компонентом средства^[27]. Максимальная дозировка: 500 мг/кг.

– Экстракты корня пиона уклоняющегося (Paeoniia anomala) производства Вистерра (1) и Грин Трейд (2). Главным действующим веществом является пеонифлорин, который также присутствует в средствах Камишойосан и Сы Ни Сань. Данное биоактивное вещество повышает экспрессию белка TPH2, снижает экспрессию белка SERT и улучшает регуляцию 5-HT_1A рецепторов^[28][29]. Максимальная дозировка: 1 г/кг.

– Экстракт корня солодки голой (Glycyrrhiza glabra) производства Вистерра. Содержит ликвиритигенин – вещество, которое предположительно может в какой-то мере отвечать за влияние на экспрессию белка TPH2 средством Камишойосан^[18]. Максимальная дозировка: 1 г/кг.

– Экстракт корня имбиря (Zingiber officinale) производства PAPAUR. Содержит шогаол – частичный агонист 5-HT_1A рецепторов^[18]. Максимальная дозировка: 300 мг/кг.

– Экстракт горца многоцветкового (Polygonum multiflorum), средство Fo-Ti производства Now Foods. Содержит эмодин – агонист 5-HT_1B рецепторов^[30]. Максимальная дозировка: 560 мг/кг.

– Экстракт лигустикума полосатого (валличи) (Ligusticum Wallichi), продавец NaturalHealth Powder Store. Повышает уровень серотонина и регуляцию 5-HT_1B рецепторов^[31]. Максимальная дозировка: 100 мг/кг.

– Экстракт ункарии клюволистой (Uncaria rhynchophylla), бренда XMas. Компонент средства Йокукансан, который отвечает за его селективный антиагрессивный эффект^[19]. Главное действующее вещество – гейсошизин метиловый эфир, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов. Максимальная дозировка: 300 мг/кг.

– Золмитриптан (Zolmitriptan) производства Северная Звезда НАО. Работает как агонист 5-HT_1B/1D рецепторов и способен оказывать селективный антиагрессивный эффект^[17]. Также слабо связывается с 5-HT_1A рецепторами^[32]. Максимальная дозировка: 10 мг/кг.

– Суматриптан (Sumatriptan) производства Озон. Работает как агонист 5-HT_1B/1D рецепторов^[33]. Максимальная дозировка: 10 мг/кг.

– Вортиоксетин (Vortioxetine), средство Бринтелликс (Brintellix). Работает как полный агонист 5-HT_1A и частичный 5-HT_1B рецепторов. По мнению исследователей имеет потенциал для того, чтобы быть эффективным антиагрессивным агентом^[11]. Максимальная дозировка: 1 мг/кг.

Также для перорального применения были использованы некоторые отвары, приготовленные следующим образом: в 20-кратном объёме воды настаивается сырьё в течение одного часа, после доводится почти до кипения и слабо нагревается в течение 2 часов. Далее фильтруется и концентрируется слабым нагревом до соотношения 0,5 г. сырья на 1 мл. отвара^[34]. Список отваров:

– Порошка корня ревеня пальчатого (Rheum palmatum) производства ВитаБотаника. Содержит эмодин – агонист 5-HT_1B рецепторов^[34]. Максимальная дозировка: 4 мл/кг (2 г/кг).

– Измельчённого корня ункарии клюволистой (Uncaria rhynchophylla) производства Nairi Herbs. Содержит гейсошизин метиловый эфир, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов^[19]. Максимальная дозировка: 4 мл/кг (2 г/кг).

– Измельчённого корня цимицифуги (Cimicifuga dahurica) производства Русские корни. Работает как агонист 5-HT_1A рецепторов^[35]. Максимальная дозировка: 4 мл/кг (2 г/кг).

– Измельчённых семян зизифуса настоящего (Ziziphus jujuba) бренда Орешка. Работает как агонист 5-HT_1A рецепторов^[35]. Максимальная дозировка: 4 мл/кг (2 г/кг).

Для применения ингаляционных средств используется камера из оргстекла размером 50x40x30 см. (объёмом 60 л.) и паровой ингалятор, способный за 1 минуту испаривать 0,45-0,5 мл. жидкости и температурой испарения 43° С. В камере проделывается отверстие для запуска пара и маленькое отверстие для вентиляции. В ингалятор загружается 10 мл. жидкости, которая состоит из средства и эмульгатора Твин-80 в отношении 1:1, а также воды при необходимости довести объём жидкости до 10 мл. Использовались следующие средства:

– Эфирное масло из кожуры померанца (Citrus aurantium) производства Царство ароматов, работающее как агонист 5-HT_1A рецепторов и преимущественно состоящее из д-лимонена^[36]. Максимальный объём: 2 мл.

– Д-лимонен (D-limonene) бренда CandleM, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов ^[37]. Максимальный объём: 4 мл.

– Линалоол (Linalool) бренда GUNNA, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов и дающий селективный антиагрессивный эффект^[21][20]. Максимальный объём: 4 мл.

– Эфирное масло нероли (цветков померанца) (neroli) бренда Golden Garden, в составе которого присутствует д-лимонен, а также линалоол, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов и дающий селективный антиагрессивный эффект^[38][21]. Максимальный объём: 4,5 мл.

– Бета-пинен (β-Pinene) бренда GUNNA, работающий как агонист 5-HT_1A рецепторов^[21]. Максимальный объём: 4 мл.

– Эфирное масло петитгрейн (листьев и веток померанца) (petitgrain) бренда Golden Garden, в составе которого присутствует линалоол^[39]. Максимальный объём: 5 мл.

– Эфирное масло лигустикума полосатого (Ligusticum Wallichi), продавец ZYHT Store. Главный компонент - лигустилид. Средство было проверено ввиду происхождения из растения, экстракт которого работает как агонист 5-HT_1B рецепторов. Максимальный объём: 4,5 мл.

– Эфирное масло розы (Rose) бренда Golden Garden, работающее как агонист 5-HT_1A рецепторов. Главными компонентами являются цитронеллол и гераниол^[40]. Максимальный объём: 4 мл.

– Эфирное масло лаванды (Lavender) бренда Golden Garden, содержащее линалоол^[41]. Максимальный объём: 4 мл.

– Эфирное масло бергамота (Bergamot) бренда Golden Garden, имеющее в составе д-лимонен и линалоол^[42]. Максимальный объём: 5 мл.

– 2-фенилэтанол (2-PE), входящий в состав многих эфирных масел, а также дающий антидепрессивный эффект, который у эфирных масел часто связан с воздействием на серотонинергическую систему^[43]. Максимальный объём: 2 мл.

– Эфирные масла шалфея (бренд Бацькина баня), гвоздики и лемонграсса (бренд Golden Garden), пиона (бренд Essential Star), мелиссы (бренд Golden Garden). Не имели в значительных количествах интересующие нас действующие вещества, однако были проверены ввиду доступности, происхождения из растений, экстракты которых имеют такие вещества (масло пиона) и для сравнения результатов. Максимальные объёмы: 5 мл, 4 мл, 5 мл, 5 мл и 4 мл соответственно.

Таблица 1. Пероральное применение средств (смесей экстрактов трав, экстрактов и отваров трав)

Таблица 2. Ингаляционное применение средств (эфирных масел и действующих веществ)

Изображение 1. Подробный разбор влияния средства Камишойосан (Цзя Вей Сяо Яо Вань) на поведение крыс

Изображение 2. Подробный разбор влияния средства Сы Ни Сань на поведение крыс

Изображение 3. Подробный разбор влияния эфирных масел померанца, нероли и петитгрейн на поведение крыс